Современные представления об этиологии эпидемиологии и диагностике бруцеллеза

Этиология (причины) бруцеллеза

Возбудители — представители рода Brucella семейства Brucellaceae. Бруцеллёз человека может быть обусловлен четырьмя видами бруцелл: B. melitensis, В. abortus, В. suis и B. canis. Наиболее частая причина болезни — Brucella melitensis, которая подразделяется на три биотипа.

Основные хозяева — овцы и козы. Несколько реже встречаются Brucella abortus, представленные девятью биотипами; основной хозяин — крупный рогатый скот. У третьего вида бруцелл, Brucella suis, выделяют 4 биотипа.

https://www.youtube.com/watch?v=ytpolicyandsafety

Основные хозяева — свиньи (типы 1–3), зайцы (тип 2) и северный олень (биотип 4). Относительно редко диагностируют заболевание, обусловленное Brucella canis. Основной хозяин данного микроорганизма — собаки.

Бруцеллы отличаются выраженным полиморфизмом, они могут быть шаровидной, овальной и палочковидной формы. Размер их равен 0,3–0,6 мкм для кокковых и 0,6–2,5 мкм для палочковидных форм. Они неподвижны, спор не образуют, жгутиков не имеют, грамотрицательны.

Растут медленно на сложных питательных средах. Бруцеллы — внутриклеточные паразиты, они антигенно однородны, содержат эндотоксин. Отличаются значительной изменчивостью и переходят из S-формы в K- и L-формы.

Бруцеллы устойчивы в окружающей среде. В воде сохраняются свыше 2 мес, в молоке — 40 дней, в брынзе — 2 мес, в сыром мясе — 3 мес, в засоленном мясе — до 30 дней, в шерсти — до 4 мес. При кипячении погибают мгновенно, чувствительны к дезинфицирующим средствам, к антибиотикам тетрациклиновой группы, аминогликозидам, рифампицину, эритромицину.

Распространение бруцеллеза за рубежом и на территории бывшего СССР

По данным Объединенного комитета экспертов ВОЗ по бруцеллезу (1986), эта болезнь среди животных распространена практически во всем мире (в 155 странах), в том числе в таких развитых странах как США, Франция, Канада, Австралия, Италия, Испания.

В мировом масштабе показатель заболеваемости людей бруцеллезом варьирует от 0,01 до 200 на 100 тыс. населения (196,268). До настоящего времени наиболее широкое распространение бруцеллез имеет в странах Средиземноморья, Малой Азии (Турция, Иран), Юга и Юго-Восточной Азии (Индия, Лаос), Африки, Центральной и Южной Америки (Мексика, Бразилия, Аргентина, Чили, Парагвай, Гватемала, Колумбия) (111,183,187,224,235,236,254,273,302).

Вместе с тем ряд стран, особенно в Европе (Англия, Дания, Германия, Финляндия, Швеция, Норвегия, Швейцария, Чехия, Словакия, Румыния), а также Япония добились практически полной ликвидации этой болезни среди животных и людей (182,192,223,259,301,333).

Бруцеллез, вызванный B.melitensis, представляет проблему еще и в результате недостаточной эффективности применяемой в ряде эндемичных стран профилактической вакцины для мелкого рогатого скота, изготовленной из коровьего вида бруцелл (В.

abortus 19-ВА), не создающей достаточный протективный иммунитет у этого вида животных. В отношении эффективности вакцины B.melitensis Rev.l, также применяемой для иммунопрофилактики мелкого рогатого скота, нет единого мнения из-за небезопасности её для людей в результате высокой остаточной вирулентности.

Овцы и козы и их продукты являются наиболее важным источником инфекции, миграция B.melitensis на крупный рогатый скот представляет большую проблему для некоторых стран юго-востосточной Европы, Израиля, Кювейта и Саудовской Аравии (267).

В странах Северной Америки, Бразилии и Колумбии возбудитель свиного вида бруцелл – B.suis биовар 1 часто мигрирует на крупный рогатый скот (261), что создает эпидемиологическую опасность заражения людей этим достаточно вирулентным возбудителем (185,268).

Появились сведения о заболеваемости людей бруцеллезом, вызванной возбудителем В.maris, с тяжелым течением инфекционного процесса – поражением центральной нервной системы (308) и позвоночника – спинальным остеомиелитом (265).

Это свидетельствует о высокой вирулентности бруцелл морских животных и расширении экологического радиуса бруцеллеза для людей. Следовательно, бруцеллезная инфекция затрагивает все большие контингент людей (268).

На различных территориях циркулируют разные биовары бруцелл. Так, B.melitensis биовар 1 превалирует на территории Индии (266), Испании (294), СНГ- Казахстан (285), биовар 2 – северо-восточной Греции, а биовар 3 – Турции (194), СНГ-Грузия (334).

Изучение бруцеллеза людей (П.Ф.Здродовский) и сельскохозяйственных животных (С.Н.Вышелесский) в нашей стране началось еще в 20-годы прошлого столетия. На 1-ом Всесоюзном съезде микробиологов (1928) П.Ф.

Здродовский доложил о распространении бруцеллеза на территории СССР, приводя данные о 207 случаях этого заболевания, а также результатах экспериментальных работ по изучению возбудителя инфекции. В 1936 году по предложению П.Ф.

Здродовского в системе здравоохранения союзных республик впервые в Советском Союзе были организованы противобруцеллезные станции, руководство которыми возглавили видные ученые и специалисты Б.П.Первушин, Н.Н.Степанов, П.Ф.Самсонов, Г.А.Баландин, А.А.Гринфельд, М.Н.Перехожева.

Новое направление в области клиники и лечения бруцеллеза создали крупные советские ученые Г.П.Руднев, А.Ф.Билибин, Г.Н.Удинцев, О.Д.Соколова-Пономарева, Г.А.Пандиков, Л.К.Коровицкий, Н.Д.Беклемишев, К.В.Бунин и др.

В то время научным медицинским центром страны был Всесоюзный институт экспериментальной медицины (ВИЭМ), основанный в Петербурге в 1890 году. В проведении систематических и целенаправленных работ по изучению бруцеллезной инфекции большую роль сыграла, организованная в 1932 году П.Ф.

Здродовским, специальная лаборатория в институте экспериментальной медицины в Ленинграде. Лаборатория бруцеллеза, вошедшая затем в состав Всесоюзного института экспериментальной медицины в Москве, была исследовательским и научно-методическим центром по бруцеллезу и выполняет эти функции по настоящее время в составе Института эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф.Гамалеи.

С 1937 года лабораторию возглавляла видный ученый П.А.Вершилова. Академику П.А.Вершиловой и ее ученикам -А.А.Голубевой, Е.И.Кайтмазовой, М.И.Чернышевой, Н.Н. Островской, Е.А.Драновской, Н.А.Грековой и др.

принадлежит приоритет в области изучения патогенеза, иммунитета, эпидемиологии, усовершенствования диагностики, способствовавший успешному решению задач по снижению заболеваемости в стране. Одной из ведущих мер, являющейся инициативой академика П.А.

Вершиловой, являлась профилактическая иммунизация живой вакциной людей, работающих в очагах козье-овечьего бруцеллеза, чему предшествовали тщательные экспериментальные исследования и изучения на добровольцах.

В 1939 году была введена официальная регистрация больных бруцеллезом людей. Учитывая, что для постановки вопроса об иммунопрофилактике людей, необходимо было разработать способ профилактики овечьего бруцеллеза, были организованы экспедиции (1933-1937 гг.

) всех сотрудников бруцеллезного отделения ВИЭМ во главе с его научным руководителем П.Ф.Здродовским. В составе экспедиции были научные сотрудники П.А.Вершилова, Б.В.Воскресенский, Е.И.Кайтмазова, Х.С.Котлярова, А.А.Соловьев, И.А.Тарасова, В.А.

Штритер, в том числе сотрудники отдела патоморфологии ВИЭМ – А.А.Соловьева, М.Б.Ариель, Ленинградского и Ставропольского НИВИ – А.И.Дмитриев, А.Г.Диэсперов, М.А.Литвинов, Военно-медицинской академии имени С.М.Кирова-И.И.Рогозин, И.А.Попов.

По мнению большинства исследователей, бруцеллезная инфекция во многие районы бывшего СССР занесена с импортным племенным скотом, другие считают, что бруцеллез на данной территории существовал веками на диких копытных, но не был распознан (104).

В России заболеваемость населения бруцеллезом в различных регионах распространена неравномерно. Интенсивность распространения инфекции и длительность эпидемиологического неблагополучия менялись в зависимости от степени пораженности бруцеллезом различных видов животных, интенсивности проведения противоэпизоотических и противоэпидемических мероприятий.

В 1950-1953 гг. на территории СССР регистрировалась самая высокая заболеваемость людей — показатель заболеваемости составлял 29,3-30,2 на 100 тыс. населения, источником инфекции выступал преимущественно мелкий рогатый скот.

В дальнейшем, в результате комплексных противобруцеллезных мероприятий, заболеваемость с конца 50-х годов значительно снизилась, однако по-прежнему, неблагополучие по данной инфекции определял мелкий рогатый скот.

Так, по средним данным за 1961-1965 гг. (31);, на территории России от овец заразилось 73,1% больных, от крупного рогатого скота – 24,8%, коз – 1,4%, свиней – 0,5%, оленей – 0,2%. Мелкий рогатый скот был сосредоточен, главным образом, в Северо-Кавказском, Поволжском, Уральском, Западно-Сибирском и Восточно-Сибирском районах (80,3% всего овцепоголовья).

Здесь же имелось наибольшее число заболевших людей (93,5% от числа зарегистрированных в стране). Характерно, что распределение случаев заболеваний людей не было параллельным количеству овцепоголовья.

Например, в Уральском районе количество больных овец числилось в 2 раза меньше, чем в Поволжском (11,1% против 21,8%), а больных бруцеллезом людей было в 2 раза больше (29,3% против 16,2%). В большей степени устанавливается зависимость заболеваемости людей не от численности больных животных, а от числа пунктов, неблагополучных по козье-овечьему бруцеллезу.

Эпидемиология бруцеллеза

ТОКСОПЛАЗМОЗ ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ:ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКА И ПРОФИЛАКТИКААббазова Евгения Витальевна

Токсоплазмоз при ВИЧ-инфекции: эпидемиология, диагностика и профилактикаАббазова Евгения Витальевна

Особенности эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики брюшного тифа в экстремальных условияхРахманов Эркин Рахимович

Природная очаговость, эпидемиология, лабораторная диагностика туляремии в Краснодарском крае [Электронный ресурс]Антонов Андрей Васильевич

Крымская-Конго геморрагическая лихорадка: этиология, эпидемиология и лабораторная диагностикаСмирнова, Светлана Евгеньевна

Вопросы эпидемиологии и дифференциальной диагностики природно-очаговых трансмиссивных клещевых инфекций юга Восточной СибириХолмогорова Галина Николаевна

Резервуар и источник возбудителя — домашние животные (овцы, козы, коровы, свиньи, реже собаки). Хотя к бруцеллёзу чувствительны дикие животные (зайцы, северные олени), природных очагов инфекции нет.

Бруцеллёз распространён во многих странах мира (до 500 тыс. случаев в год), особенно в регионах с животноводческой ориентацией сельского хозяйства. В России бруцеллёз регистрируют в Республике Дагестан, Краснодарском и Ставропольском крае, на Южном Урале, Алтае, в Республике Тыва.

Человек заражается от больных животных контактным, алиментарным, редко — аэрогенным путём. Заражение контактным путём носит профессиональный характер, особенно часто происходит при попадании на кожу околоплодной жидкости (помощь при отёлах, ягнении, при уходе за новорождёнными телятами, ягнятами).

Часто заражаются ветеринарные работники, телятницы, чабаны и др. Заражение может наступить и при контакте с мясом инфицированных животных. Алиментарное заражение часто происходит при употреблении непастеризованного молока или приготовленных из него продуктов (брынза, сыр, масло).

Аэрогенное заражение возможно при попадании в дыхательные пути пыли, содержащей бруцеллы (в местах выпаса и в загонах для содержания овец), а также в лабораториях при нарушении техники безопасности.

Этот путь инфицирования наблюдают относительно редко. Чаще заболевают лица трудоспособного возраста (18–50 лет). Восприимчивость высокая. Инфицирующая доза составляет всего от 10 до 100 микробных тел. Постинфекционный иммунитет ненапряжённый, через 5–6 лет возможна реинфекция.

В соответствии с «Федеральными стандартами объёма медицинской помощи при диагностике бруцеллёза» используют следующие стандарты обследования: общий анализ крови, мочи (в динамике два раза), кал на яйца глистов, биохимическое исследование крови (концентрация билирубина, активность АЛТ, АСТ), кровь на Brucellae spp.

, анализ крови на реакцию Райта, Хеддлсона, РПГА с бруцеллёзным эритроцитарным диагностикумом, реакция Кумбса (в динамике два раза), проба Бюрне, ЭКГ, УЗИ внутренних органов, рентгенография позвоночника, суставов, консультация врача-офтальмолога, невролога (по показаниям).

При диагностике бруцеллёза учитывают эпидемиологические предпосылки. Во многих районах средней полосы и юго-запада России у животных бруцеллёз давно уже ликвидирован — следовательно, условия для заражения людей отсутствуют.

В этих регионах бруцеллёз — «завозная» инфекция. Необходимо уточнить пребывание в местах, где бруцеллёз ещё встречают. Но иногда заражение происходит через продукты, инфицированные бруцеллами (брынза домашнего изготовления, молоко и др.).

Лабораторное подтверждение бруцеллёза ограничено, поскольку бруцеллы относятся к опасным возбудителям. Их выделение можно проводить только в специальных лабораториях, оборудованных в соответствии с требованиями профилактики.

При серологических и аллергологических исследованиях необходимо учитывать, что у привитых против бруцеллёза (прививают группы риска, профессионально контактирующие с животными) довольно долго могут быть положительными результаты и серологических реакций, и особенно аллергических проб.

Из серологических реакций наиболее информативна РА (реакция Райта). Агглютинацию на стекле (реакция Хеддлсона) для диагностики не используют. Она предложена для выявления лиц, подлежащих обследованию на бруцеллёз, при массовых обследованиях по эпидемиологическим показаниям.

Реакция Хеддлсона часто даёт ложноположительные результаты. В определённой степени это связано с перекрёстными реакциями с рядом антигенов (иерсинии, возбудитель туляремии, противохолерная вакцинация и др.).

Следует учитывать, что В. melitensis и В. аbortus имеют перекрёстные реакции между собой, но не с В. canis, так что для выявления антител к этой бруцелле необходим специальный диагностикум, который пока ещё не выпускают. Возможно, это одна из причин того, что данную разновидность бруцеллёза выявляют редко.

При остросептической форме бруцеллёза антитела можно определить на 2-й неделе болезни, в дальнейшем титр их нарастает. Аллергическая проба становится положительной в конце первой и на 2-й неделе. При хронических формах нарастания титра антител часто не обнаруживают.

Следует учитывать, что постановка аллергической пробы (проба Бюрне) может спровоцировать появление антител или нарастание их титра. Другие серологические реакции: РПГА, острофазовые реакции — менее информативны по сравнению с реакцией Райта и не имеют существенного значения.

В последние годы применяют более чувствительный метод ИФА для определения IgG- и IgM-антител. Отрицательные результаты пробы Бюрне позволяют исключить бруцеллёз (кроме ВИЧ-инфицированных, у которых исчезают все реакции ГЗТ).

Существенно различается в зависимости от формы бруцеллёза. Остросептическую форму следует дифференцировать от многих заболеваний, сопровождающихся высокой лихорадкой. Основное отличие бруцеллёза — удовлетворительное самочувствие больных при температуре 39–40 °С, хотя при некоторых болезнях (лимфогранулематоз, туберкулёз) самочувствие также может оставаться удовлетворительным при высокой температуре.

При остросептической форме бруцеллёза нет очаговых органных поражений (метастазы), бывают лишь увеличены печень и селезёнка, отсутствуют изменения крови (рис. 17-1).

Труднее дифференцировать хронические формы бруцеллёза. Их особенность — поражение суставов, в связи с чем их следует дифференцировать от многих болезней, характеризующихся артритом. Острые артриты могут появляться при многих острых инфекционных болезнях (псевдотуберкулёз, иерсиниоз, эпидемический паротит, краснуха, скарлатина и др.).

Более тяжёлое гнойное поражение суставов наблюдают при сепсисе и генерализованных формах ряда болезней (сап, мелиоидоз, листериоз). Отличие данных заболеваний — тяжёлое состояние больных, тогда как больные бруцеллёзом чувствуют себя удовлетворительно.

ревматоидного артрита, системной красной волчанки системной склеродермии, псориатического артрита, саркоидоза. Отличить их от бруцеллёза можно по комплексу клинических признаков, не характерных для бруцеллёза.

Рис. 17-1. Алгоритм дифференциальной диагностики остросептической формы бруцеллёза.

Рис.17-2. Алгоритм дифференциальной диагностики хронического бруцеллёза.

При висцеральных формах бруцеллёза с поражением сердечно-сосудистой системы — консультация кардиолога, при урогенитальных формах — консультация уролога или акушера-гинеколога.

А23.9. Хронический бруцеллёз, комбинированная форма (локомоторная уро- генитальная), стадия субкомпенсации.

Для лабораторной
диагностики бруцеллеза у людей применяются три группы методов:
первая – тесты, позволяющие выявить возбудитель заболевания и его
растворимые антигены; вторая – методы определения специфических
антител;

5.1.1. Бактериологический методВся работа по выделению и
дифференциации бруцелл из любого исследуемого материала должна
проводиться в условиях, предупреждающих возможность инфицирования
персонала и обсеменения возбудителем объектов внешней среды, в
строгом соответствии с санитарными правилами “Безопасность работы с
микроорганизмами I-II групп патогенности. СП 1.2.011-94″*.

Характерной особенностью
рода Brucella является медленный рост на питательных средах,
особенно в первых генерациях. При посевах крови, костного мозга и
мочи культуры бруцелл обнаруживаются через 5-10 дней, а иногда
через 20-30 дней после засева.

При этом первые генерации культур
B.abortus и B.ovis способны расти только при наличии в атмосфере
повышенного содержания углекислоты (5-10%). Биовары B.abortus 5, 6
и 7 могут расти в обычных аэробных условиях.

Предлагаем ознакомиться:  Длительность инкубационного периода при заражении герпесом

Для выделения культур
бруцелл рекомендуются следующие среды: сывороточно-декстрозный
агар, агар из картофельного настоя сыворотка и кровяной агар (5%
овечьей крови в среде), Albimi – агар, среда “Д”, печеночные и
мясопептонные агары и бульоны (pH сред – 6,8-7,2).

Рецепты
приготовления сред приведены в конце указаний. В настоящее время в
практике широко используется коммерческая среда для выделения
бруцелл – эритрит агар (г.Махачкала). Следует отметить, что данная
среда является высокоэффективной для выделения первой генерации
возбудителя.

Однако при последующих пересевах на этом агаре
изучаемая культура бруцелл может диссоциировать.Посевы следует
производить на предварительно проверенные питательные среды.Для проверки агара из
2-суточной культуры B.

melitensis или B.abortus готовят суспензию
бруцелл в концентрации 200 мк в 1 мл (по стандарту мутности ГИСК
им. Л.А.Тарасевича). Посев проводят на 4 чашки по 0,1 мл – 20 мкл
суспензии. Агар признается пригодным, если через 5 суток пребывания
в термостате при 37 °С в среднем вырастает не менее 18 колоний на
чашку.

Исследование крови и
другого биологического материала. Посевы крови рекомендуется
делать во время лихорадочного состояния больного, т.к. в этот
период наблюдается наибольший процент выделения культур.

Однако не
исключена возможность получения гемокультуры и при нормальной
температуре. Кровь для посева следует брать до лечения
антибиотиками. Посевы крови рекомендуется проводить во флаконы
(желательно прямоугольные) емкостью 100-200 мл, в которые наливают
по 30-50 мл агара.

После стерилизации их укладывают так, чтобы агар
застыл на одной из сторон флакона. Затем в каждый флакон стерильно
добавляют по 25-30 мл предварительно простерилизованного бульона и
выдерживают в термостате при 37 °С в течение 2-3 суток (агар с
бульоном может быть использован не позднее 5-7 дней).

Кровь в
количестве не менее 10 мл стерильно берут шприцем из локтевой вены
и засевают по 5 мл в два флакона. Один из флаконов инкубируют при
повышенном содержании углекислоты (5-10%), а другой – в обычных
условиях.

Начиная с четвертого дня после посева, флаконы
просматривают и при отсутствии роста культуры поверхность агара
орошают бульоном. При положительном результате на поверхности агара
появляются колонии бруцелл.

Если в течение месяца бруцеллы не
обнаруживаются, то в этом случае делают контрольный высев из
бульона на твердую питательную среду. При бактериологическом
обследовании больных, прошедших курс лечения антибиотиками, через 1
месяц и спустя 4-6 месяцев после окончания курса
антибиотикотерапии, а также больных хронической формой бруцеллеза в
период обострения (особенно при субфебрилитете) перед началом
лечения рекомендуется проводить посевы крови, пунктатов костного
мозга и лимфатических узлов на специальную питательную среду для
выделения L-культур бруцелл (состав питательной среды см. в конце
указаний).

Определение бруцеллезных антигенов с помощью ФИАВР

Использование новых флуорохромов с большой продолжительностью флуоресценции позволяет регистрировать специфический сигнал после угасания непродолжительного фонового свечения, что значительно повышает чувствительность анализа.

В диссоционно-усиленном лантанидном флуоресцентном иммуноанализе в качестве метки наиболее часто используют ионы Европия (Ей), тяжелого металла группы лантанидов. Для образования прочной связи с белком и стабильного комплекса с ионом лантанида обычно применяют бифункциональные производные поликарбоновых кислот.

На стадии детекции ионы Ей диссоциируют из меченого антитела с поверхности твердой фазы в специальный раствор и образуют новый высоко флуоресциирующий комплекс. Флуориметр ” Arcus 1230 ” (LKB – Wallac, Finland) регистрирует флуоресценцию Ей в диапазоне 5 х 10″14 – 10″7М.

Время измерения одного образца составляет 1 секунду (240). И.В.Пономаревой (121) отработаны оптимальные условия синтеза конъюгата и проведения двухстадийного сэндвич-варианта флуоресцентного иммуноанализа.

Совместно с автором нами была разработана тест-система диссоционно-усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноанализа для выявления бруцеллезного антигена, определены специфичность и чувствительность ФИАВР.

Специфичность ФИАВР изучена нами в реакции торможения бруцеллезными антителами, а также при исследовании антигенов гетерогенных микроорганизмов. Особое внимание было уделено исследованию антигенов F.tularensis и Y.

enterocolitica 0-9, которые, как известно, имеют общие антигенные детерминанты с бруцеллами. Было установлено, что растворимый антиген туляремийного микроба не выявлялся в ФИАВР в концентрации 1000 нг/мл, а корпускулярные антигены не о обнаруживались даже в концентрации 1×10 мкл/мл.

Растворимый антиген Y.enterocolitica 0-9 определялся лишь в концентрациях, превышающих чувствительность ФИАВР по отношению гомологичных антигенов, более чем в 50 раз. Корпускулярный антиген Y.enterocolitica 0-9 выявляли в концентрации 5х106мкл/мл.

Чувствительность ФИАВР при выявлении растворимого антигена (ЛПС) В.abortus 99 при разведении его в нормальной сыворотке человека составляла ОД нг/мл. В диапазоне концентраций от 0,6 до 250 нг/мл была получена линейная зависимость флуоресцентного сигнала от концентрации антигена в пробе (рис.12)

Каждая точка калибровочной кривой соответствует среднему значению флуоресцентного сигнала, рассчитанному по данным 10 повторных определений. При этом было отмечено, что во всем диапазоне определяемых концентраций были получены высокие соотношения сигнал/фон, следовательно, метод обеспечивал высокую достоверность результатов.

Кроме того, чувствительность ФИАВР изучена на 9 штаммах бруцелл в S-форме, относящихся к B.melitensis, abortus и suis. Все микроорганизмы этих штаммов выявлялись в концентрации 1,5х104мкл/мл. Штаммы B.

abortus 99,19-ВА, В.suis 1330, B.melitensis 565 давали достоверно положительные результаты в концентрации 7,5×10 мкл/мл. Изучена возможность выявления бруцеллезных антигенов с помощью ФИАВР в смеси с гетерогенными микроорганизмами.

При этом убитую культуру B.abortus 99 последовательно разводили в суспензии, содержащей 1×10 мкл/мл E.coli 0111. ФИАВР позволял определить бруцеллезный антиген в присутствии избытка гетерологичных микрорганизмов практически без снижения чувствительности (рис.13).

Нами были проведены исследования по выявлению бруцеллезного антигена в клиническом материале с помощью ФИАВР. Исследованы 160 сывороток крови людей больных острой и хронической формами бруцеллеза. Результаты ФИАВР сравнивали с результатами ИФА.

Анализы выполняли в один и тот же день, чтобы избежать расхождения результатов. В ИФА для определения антигенов в высоких концентрациях требовалось разведение образцов или сокращение времени проведения ферментативной реакции с последующей интерполяцией результатов к стандартному времени реакции.

В ФИАВР, вследствие широкого динамического диапазона, исследования клинических образцов проводили без дополнительного разведения, что упрощало процедуру исследования и позволяло избежать ошибки, возможной при разведении образцов.

Таким образом, проведенные исследования показали, что ФИАВР обладает высокой чувствительностью при определении как растворимого, так и корпускулярного специфических антигенов. Анализ имеет высокую специфичность и позволяет выявлять бруцеллезные антигены в смеси с гетерологичными микроорганизмами без снижения чувствительности.

ФИАВР может быть использован как в эпидемиологической, так и клинической практике. Однако ФИАВР имеет ряд недостатков, основными из которых являются – необходимость высокой чистоты проведения анализа и специального импортного оборудования для учета реакции.

Патогенез бруцеллеза

Входные ворота инфекции — микротравмы кожи, слизистые оболочки органов пищеварения и респираторного тракта. В месте внедрения возбудителя изменений не наблюдают. По лимфатическим путям бруцеллы достигают регионарных лимфатических узлов, но и здесь выраженные изменения отсутствуют.

Размножение и накопление бруцелл происходит преимущественно в лимфатических узлах, из которых они периодически поступают в кровь, а гибель сопровождается освобождением эндотоксина, вызывающего лихорадку, поражение вегетативной нервной системы.

С кровотоком возбудитель разносится по всему организму, концентрируясь в органах и тканях, богатых макрофагами (печень, селезёнка, мышцы, фасции, суставные сумки, сухожилия), где вследствие незавершённого фагоцитоза длительно сохраняется, вызывает воспалительную реакцию с образованием специфических гранулём.

Для бруцеллёза характерна выраженная аллергическая перестройка организма, резко выражена ГЗТ, сохраняющаяся длительное время даже после освобождения организма от возбудителя. Аллергия играет большую роль в формировании вторичных очагов инфекции.

Бруцеллёз отличается склонностью к хроническому течению, что связано с длительным персистированием бруцелл в организме. До введения в лечебную практику антибиотиков бруцеллы сохранялись в организме до двух лет, более длительное течение болезни связано с влиянием антибиотиков: часть бруцелл может переходить в L-формы и длительно сохраняется внутриклеточно.

Клиническая картина (симптомы) бруцеллеза

Инкубационный период при остром начале бруцеллёза продолжается около 3 нед, однако если бруцеллёз начинается как первично-латентный, который затем переходит в клинически выраженную форму, то инкубация может длиться несколько месяцев.

https://www.youtube.com/watch?v=https:tv.youtube.com

Наиболее обоснована классификация клинических форм бруцеллёза, предложенная Н.И. Рагозой (1952) и построенная на клинико-патогенетическом принципе. Н.И. Рагоза показал фазность динамики бруцеллёзного процесса. Он выделил четыре фазы:

  • компенсированной инфекции (первично-латентная);
  • острого сепсиса без местных поражений (декомпенсация),
  • подострого или хронического рецидивирующего заболевания с образованием местных поражений (декомпенсация или субкомпенсация);
  • восстановления компенсации с остаточными явлениями или без них.

С этими фазами тесно связаны и выделены пять клинических форм бруцеллёза:

  • первично-латентная;
  • остросептическая;
  • первично-хроническая метастатическая;
  • вторично-хроническая метастатическая;
  • вторично-латентная.

В качестве отдельного варианта выделена септико-метастатическая форма, к которой относят те случаи, когда на фоне остросептической формы обнаруживают отдельные очаговые изменения (метастазы). В классификации показана динамика дальнейшего развития каждой выделенной формы.

Первично-латентная форма бруцеллёза характеризуется состоянием практического здоровья. Включение её в классификацию клинических форм обусловлено тем, что при ослаблении защитных сил организма она может перейти или в остро-септическую или в первично-хроническую метастатическую форму.

При тщательном обследовании лиц с этой формой бруцеллёзной инфекции иногда можно обнаружить микросимптомы в виде небольшого увеличения периферических лимфатических узлов, субфебрилитета, повышенной потливости при физическом напряжении. Однако эти лица считают себя здоровыми и полностью сохраняют работоспособность.

Остросептическая форма характеризуется высокой лихорадкой (39–40 °С и выше), температурная кривая имеет в ряде случаев тенденцию к волнообразному течению, нередко неправильного (септического) типа с большой суточной амплитудой, повторными приступами озноба и пота.

Несмотря на высокую и очень высокую температуру тела, самочувствие больного остаётся удовлетворительным (при температуре 39 °С и выше больной может читать, смотреть телевизор и т.д.). Отсутствуют и другие признаки общей интоксикации.

Характерно умеренное увеличение всех групп лимфатических узлов, некоторые из них чувствительны при пальпации. К концу первой недели болезни часто увеличиваются печень и селезёнка. При исследовании периферической крови отмечается лейкопения, СОЭ не повышена.

Главное отличие этой формы — отсутствие очаговых изменений (метастазов). Без антибиотикотерапии лихорадка может длиться 3–4 нед и более. Эта форма не угрожает жизни больного и даже без этиотропного лечения заканчивается выздоровлением.

Хронические формы бруцеллёза в одних случаях развиваются сразу, минуя острую фазу, в других случаях признаки хронического бруцеллёза появляются спустя какое-то время после остросептической формы бруцеллёза.

Клинически хронические формы характеризуются синдромом общей интоксикации, на фоне которой наблюдают ряд органных поражений. Отмечают дли- тельный субфебрилитет, слабость, повышенную раздражительность, плохой сон, нарушение аппетита, снижение работоспособности.

Почти у всех больных наблюдают генерализованную лимфаденопатию, причём наряду с относительно недавно появившимися увеличенными узлами (мягкие, чувствительные или болезненные при пальпации) отмечают мелкие, очень плотные безболезненные склерозированные лимфатические узлы (0,5–0,7 см в диаметре). Часто обнаруживают увеличение печени и селезёнки. На этом фоне выявляют органные поражения.

Наиболее типично поражение опорно-двигательного аппарата. Больные жалуются на боли в мышцах и суставах, преимущественно в крупных. Для бруцеллёза характерен полиартрит, при каждом обострении в процесс вовлекаются новые суставы.

Чаще поражаются коленный, локтевой, плечевой, тазобедренный суставы, редко — мелкие суставы кисти и стоп. Характерны периартрит, параартрит, бурсит, экзостозы. Суставы опухают, подвижность в них ограничена, кожа над ними, как правило, нормальной окраски.

Для бруцеллёза типичен сакроилеит, диагностическая значимость его крайне велика, так как другие этиологические агенты вызывают его очень редко. Для выявления саркоилеита существует ряд диагностических приёмов.

Информативен симптом Эриксена: больного укладывают на перевязочный стол и производят давление на гребень подвздошной кости при положении на боку или сдавливают обеими руками передние верхние гребни подвздошных костей в положении на спине.

Для диагностики сакроилеитов проверяют наличие и других симптомов: Нахласса, Ларрея, Джона–Бера, Ганслена, Фергансона и др.

больного укладывают на стол в положение на спине. Врач обеими руками растягивает в стороны выступы крыльев подвздошных костей, при этом возникает боль на поражённой стороне (при одностороннем сакроилеите).

При хронических формах бруцеллёза часто поражаются не только суставы, но и мышцы. Миозиты проявляются тупыми, продолжительными болями в поражённых мышцах, интенсивность их нередко связана с изменениями погоды.

При пальпации, чаще в мышцах конечностей и поясницы, определяют более болезненные участки, а в толще мышц прощупывают болезненные уплотнения различных размеров и формы. Чаще они пальпируются в виде тяжей, валиков, реже имеют округлую или овальную форму.

Со временем в одном участке изменения мышц проходят, но появляются воспалительные очаги в других мышечных группах. После введения специфического антигена (например, при постановке пробы Бюрне) болевые ощущения в области поражённых мышц заметно усиливаются, а иногда можно определить и увеличение размеров воспалительного инфильтрата.

Помимо миозитов, у больных бруцеллёзом часто (до 50–60%) выявляют фиброзит (целлюлит), который может локализоваться в подкожной клетчатке на голенях, предплечьях и особенно часто на спине и пояснице.

Размеры области фиброзитов (целлюлитов) колеблются от 5–10 мм до 3–4 см. Вначале их прощупывают в виде мягких овальных образований, болезненных или чувствительных при пальпации (иногда больные сами обращают внимание на их появление).

В дальнейшем они уменьшаются в размерах, могут полностью рассосаться или склерозируются и остаются на длительное время в виде небольших плотных образований, безболезненных при пальпации. При обострениях возможно появление новых фиброзитов.

Поражение нервной системы при хроническом бруцеллёзе проявляется чаще всего невритом, полиневритом, радикулитом. Поражение ЦНС (миелит, менингит, энцефалит, менингоэнцефалит) наблюдают редко, но эти осложнения протекают длительно и довольно тяжело.

Изменения половой системы у мужчин выражены орхитом, эпидидимитом; снижена половая функция. У женщин наблюдают сальпингит, метрит, эндометрит. Возникает аменорея, может развиться бесплодие. У беременных часты аборты, мертворождения, преждевременные роды. Описан врождённый бруцеллёз у детей.

Иногда наблюдают поражения глаз (ирит, хориоретинит, увеит, кератиты, атрофия зрительного нерва и др.).

При аэрогенном заражении часто развиваются вялотекущие бруцеллёзные пневмонии, которые безуспешно лечатся антибиотиками.

Возможны миокардит, эндокардит, аортит и другие поражения сердечно-сосудистой системы.

Вторично-хроническая форма протекает так же, как и первично-хроническая. И та и другая заканчивается переходом во вторично-латентную форму, может неоднократно рецидивировать.

Вторично-латентная форма отличается от первично-латентной тем, что она значительно чаще переходит в манифестные формы (рецидивирует); кроме того, на фоне вторичной латенции возможно развитие различных резидуальных явлений после хронических форм (ограничение подвижности суставов, бесплодие, нарушение зрения и т.д.).

Течение бруцеллёза зависит от вида возбудителя. При овечьем бруцеллёзе (Brucella melitensis) болезнь чаще начинается с остросептической формы и протекает тяжелее, при заражении от коров (Brucella abortus) часто возникает как первично-хроническая метастатическая или даже как первично-латентная форма.

https://www.youtube.com/watch?v=https:ZVUyDmtbMZ4

Осложнения, вызванные вторичной флорой, редки.

В современных условиях диагностика большинства инфекционных заболеваний, в том числе и бруцеллеза, ввиду их выраженного клинического полиморфизма невозможна без объективного лабораторного подтверждения.

При тестировании сывороток крови людей, больных острой (I группа), подострой (II группа) и хронической формой (III группа) бруцеллеза с помощью ПЦР были получены положительные результаты практически у всех обследованных больных (96,3±3,7%, 100% и 95,9±1,6% соответственно).

Следует отметить, что все больные находились на стационарном лечении и были обследованы в период активного течения инфекционного процесса с выраженными клиническими проявлениями. Частота положительных ответов в серологических реакциях при этих формах заболевания подтверждали это.

Предлагаем ознакомиться:  Эффективное лечение опоясывающего лишая народными средствами

Наиболее эффективными серологическими тестами при диагностике всех форм заболевания явились реакция Кумбса и ИФА, с помощью которых бруцеллезные антитела были выявлены в 97,1-100% случаев при подострой и острой и 79,3-82,2%) при хронической формах бруцеллеза (соответственно).

Специфические иммуноглобулины разных классов (G, А, М) при бруцеллезе у людей

Ранее нами была изучена физико-химическая природа специфических антител у людей, больных бруцеллезом, в различные фазы инфекционного процесса с помощью 2 МЭ-теста. Синтез IgM и IgG антител определяли в динамике заболевания (в течение 48 недель).

Показано, что в первые недели развития инфекционного процесса выявляются, главным образом, агглютинины класса IgM. Неполные антитела синтезируются уже в ранние сроки и относятся к IgG-антителам. Выраженная клиническая картина у обследованных больных позволяет сделать заключение, что неполные антитела в большей мере, чем агглютинины и гемагглютинины, отражают продолжающийся инфекционный процесс (165).

У людей в острой стадии заболевания с бактериологически подтвержденным диагнозом в сыворотке крови, как правило, выявляются специфические IgG антитела (55,298). Выявление IgG антител авторы связывают с наличием в организме живого возбудителя и, как следствие этого, с усиленной антигенной стимуляцией.

У выздоравливающих и у лиц, имевших лишь контакт с возбудителем, по мнению авторов, преобладают IgM антитела. Следовательно, наличие IgG антител в сыворотке крови, по-видимому, может указывать на наличие активности инфекционного процесса (200).

Это положение было подтверждено данными других авторов (55,80). У больных острым бруцеллезом в 100% случаев были обнаружены цистеинрезистентные IgG антитела. При хронической форме с давностью заболевания от 3 до 20 лет IgG антитела выявляли в пределах 10% случаев, главным образом, с тяжелым клиническим течением острого бруцеллеза и при декомпенсации хронического (55).

Таким образом, острая и подострая форма заболевания характеризуются наличием специфических IgG антител, что может явиться показателем активности инфекционного процесса и косвенно свидетельствовать о наличии возбудителя или его растворимых антигенов в организме.

Анализируя результаты изучения физико-химической природы специфических антител, выявляемых с помощью обработки сывороток редуцирующими веществами с последующим исследованием их в серологических реакциях, следует отметить, что этот метод позволяет конкретно судить только о синтезе IgG и косвенно – IgM антител.

Данный тест не позволяет выявить специфические антитела, относящиеся к IgA и в связи с этим долгое время функция этого класса иммуноглобулинов оставалась не изученной, автоматически считалось, что специфические IgA антитела не играют какой-либо роли при бруцеллезной инфекции (255).

Наиболее информативным методом выявления специфических антител разных классов является метод адсорбции сыворотками (анти- IgG, IgA, IgM) с последующим исследованием в серологических тестах. Используя этот метод удалось выявить не только специфические антитела классов IgM и IgG, но и IgA (328).

В последние годы большое внимание уделялось иммуноферментному анализу (ИФА) и возможности его использования для диагностики бруцеллеза у животных и людей (119,186,290), а также выявления с его помощью специфических иммуноглобулинов разных классов (IgG,IgA,IgM,IgE).

В данном разделе работы проведены исследования по отработке оптимальных условий ИФА и сравнительное изучение специфичности и чувствительности при различных клинических формах бруцеллеза.

В качестве твердофазного носителя применяли отечественные планшеты для иммунологических реакций (ТУ-64-2-278-79). Для сенсибилизации полистирола испытывали следующие растворимые антигены: 1 — антиген Буавена из штамма В.

Для получения пероксидазного конъюгата использовали кроличьи сыворотки против IgG (Н L) человека с титром реакции преципитации в геле 1:32. Иммуноглобулиновую фракцию, полученную по методу A. Poison с соавт.

(293), конъюгировали с пероксидазой хрена типа A, Rz 3,0 (НПО «Биохимреактив», г. Олайне) методом периодатном окислении по М. В. Wilson и соавт. (329) с очисткой конъюгата от свободной пероксидазы на колонке с сефарозой 6В.

Концентрация белка в конъюгате 1,2 мг/кг, Rz – отношение оптических плотностей при длинах волн 403 и 280 нм-0,5. Конъюгаты стабилизировали добавлением бычьего сывороточного альбумина (БСА) до концентрации 10 мг/мл, разливали в ампулы и лиофилизировали.

Оптимальную концентрацию антигена, обеспечивающую наибольшую чувствительность реакции, и рабочее разведение конъюгата определяли опытным путем – титрованием положительных и отрицательных сывороток с разными дозами антигена на сорбенте и при разных разведениях конъюгата в шахматном порядке.

Для постановки реакции растворы антигенов в 0,1 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ) рН 7,4 и в 0,05 М карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,5 в разных концентрации (0,1-100 мкл) вносили в лунки полистироловых пластин в объеме 200мкл. Иммобилизацию проводили 2 ч при 37С или 16 ч при 4 С.

Несвязавшийся антиген удаляли и после 3-4 кратной промывки ФСБ с 0,05% твин-20 в лунки вносили 2-кратные разведения опытных и контрольных сывороток в том же буфере начиная с разведения 1:50. Реакцию взаимодействия антиген-антитело проводили 1ч при 37С с последующей промывкой.

Конъюгат разводили в 50% нормальной бычьей сыворотке в ФСБ. Инкубация с конъюгатом 1ч при 37С. После 4-5 — кратной промывки ФСБ с 0,05%о твин-20 вносили субстрат-индикаторный раствор (0,04%о 0-фенилен-диамина в 0,05М цитратно-фосфатном буфере рН 6,0 с 0,04% Н2Ог) в том же объеме. Через 30 мин реакцию останавливали добавлением 100 мкл Ш. раствора серной кислоты.

При постановке реакции ставили контроли субстрата, сорбции коньюгата на сенсибилизированный антигеном полистирол, реакции с положительной контрольной сывороткой, реакции с отрицательной контрольной сывороткой, специфичности – реакция торможения специфическим антигеном.

Результаты учитывали на фотометре фирмы «Flow Laboratories» при длине волны 492 нм. Положительным считали результат, более чем в 2 раза превышающий оптическую плотность (ОП) в лунках с отрицательными контролями, но не ниже 0,2.

При изучении зависимости чувствительности иммуноферментной тест-системы от природы антигена и физико-химических условий его адсорбции принципиальных различий выявлено не было. Все исследуемые антигены полнее адсорбировались в ФСБ рН 7,4, но при одинаковом времени адсорбции оптимальная концентрация для солевого антигена составляла 1-10 мкг/мл, а для антигена Буавена-не менее 10 мкг/мл.

Похожие диссертации на Бруцеллез в России: современная эпидемиология и лабораторная диагностика

ТОКСОПЛАЗМОЗ ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ:ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКА И ПРОФИЛАКТИКААббазова Евгения Витальевна

Токсоплазмоз при ВИЧ-инфекции: эпидемиология, диагностика и профилактикаАббазова Евгения Витальевна

Особенности эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики брюшного тифа в экстремальных условияхРахманов Эркин Рахимович

Природная очаговость, эпидемиология, лабораторная диагностика туляремии в Краснодарском крае [Электронный ресурс]Антонов Андрей Васильевич

Крымская-Конго геморрагическая лихорадка: этиология, эпидемиология и лабораторная диагностикаСмирнова, Светлана Евгеньевна

Вопросы эпидемиологии и дифференциальной диагностики природно-очаговых трансмиссивных клещевых инфекций юга Восточной СибириХолмогорова Галина Николаевна

Похожие диссертации на Бруцеллез в России: современная эпидемиология и лабораторная диагностика

5.1.2. Биологический методДля выделения бруцелл из
материалов, загрязненных посторонней микрофлорой и при малой
концентрации бруцелл в исследуемом материале, используются морские
свинки (весом 300-350 г) или белые мыши (весом 17-18 г).

Исследуемый материал вводят подкожно в паховую область в дозах не
более 0,5 мл для мышей и 1 мл для морских свинок.Вскрытие белых мышей
производится через 20-25 дней, а морских свинок – через 30-35 дней
после введения исследуемого материала.

https://www.youtube.com/watch?v=upload

паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный, кусочки
селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей
лимфатические узлы: паховый, акселярный, парааортальный,
подчелюстной, кусочки селезенки и печени.

Лимфатические узлы,
кусочки печени и селезенки помещают в стерильную чашку. Костный
мозг для засева берут пипеткой из рассеченной бедренной кости.
Посевы крови из сердца, а также мочи и костного мозга производят
стерильной пипеткой непосредственно на питательные среды (агар и
бульон).

Лимфатические узлы животных перед посевом рекомендуется
надсекать ножницами. После этого каждый лимфатический узел и
кусочки органов (по возможности больше) берут “уколом” стерильной
деревянной палочки (палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром
4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом) и
вносят первоначально в пробирку с агаром, где той же палочкой
материал раздавливают и тщательно втирают в поверхность питательной
среды.

Затем остатки посевного
материала переносят в пробирку с бульоном. После использования
палочки погружают на 1 час в дезраствор (5% раствор фенола), затем
автоклавируют, после чего тщательно промывают и стерилизуют для
последующего употребления.

Посевы выдерживают при 37 °С в
термостате 20-25 дней. Просмотр посевов на пробирках с агаром и
бульоном производят каждые 3-4 дня, из помутневших бульонов делают
высевы на пробирки со скошенным агаром.

5.1.3. Методы
идентификации бруцеллДля определения
принадлежности выделенных культур к роду Brucella можно
использовать следующие методы: изучение морфологии колоний,
микроскопия окрашенных препаратов по Граму или Козловскому,
люминесцентная микроскопия и проба со специфической сывороткой в
реакции агглютинации на стекле.

Морфология колоний.
Колонии бруцелл на агаре бесцветны, выпуклы (холмиком), с гладкой
поверхностью, гомогенны, иногда с нежной зернистостью в центре
колонии. С возрастом нежные и прозрачные колонии постепенно
мутнеют.

Величина колоний может
быть различной. Наряду с крупными, достигающими в диаметре 3-4 мм и
больше, могут быть очень мелкие – точечные колонии 0,1-0,05 мм.
Различные факторы (pH питательной среды, влажность, наличие
бактериофага в культуре и др.

), влияющие на биологию культуры,
могут привести также к изменению внешнего вида колоний (встречаются
зернистые, стекловидные колонии, растущие в толще агара,
эрозированные, сухие, слизистые, радиально исчерченные и др.).

Для изучения структуры
колоний целесообразно использовать стереоскопическую лупу МБС-1 или
обычный микроскоп с объективом наименьшего увеличения.Микроскопия окрашенных
препаратов. При окраске по Граму бруцеллы грамотрицательны
(окрашиваются в красный цвет).

Окрашивание препаратов по способу
Козловского: препараты, фиксированные на пламени горелки или
спиртовки, окрашивают 0,5% водным раствором сафранина при
подогревании до появления пузырьков, промывают дистиллированной
водой и докрашивают 0,5%-ным водным раствором малахитовой или
бриллиантовой зелени в течение 40-50 секунд.

Бруцеллы сохраняют
красную окраску сафранина, а остальные бактерии окрашиваются в
зеленый цвет.Проба со специфической
сывороткой. Для предварительной, быстрой идентификации ставят
реакцию агглютинации на стекле.

На предметное стекло наносят каплю
специфической сыворотки, разведенной 1:25 0,5% карболизированным
физиологическим раствором, в которой эмульгируется одна петля
исследуемой культуры. В положительных случаях быстро (в течение 1
минуты) наступает агглютинация с образованием хорошо выраженных
хлопьев, в отрицательных – суспензия остается гомогенной.

Для
контроля исследуемую культуру эмульгируют в капле нормальной
сыворотки или физиологическом растворе.Люминесцентная микроскопия (см.раздел 4 “Идентификация
бруцелл в воде и пищевых продуктах”).

5.1.4. Методы
идентификации L-форм бруцеллДля определения
принадлежности выделенных L-культур к роду Brucella можно
использовать следующие методы: изучение характера роста и
морфологии колоний, микроскопия нативных препаратов, проба со
специфической сывороткой в реакции агглютинации на стекле, а также
способность к росту на специфической питательной среде с
пенициллином.

Характер роста и
морфологии L-форм бруцелл. L-колонии бруцелл могут быть
изолированными или в виде нежного сплошного налета. Колонии от 2 до
3 мм имеют золотистый цвет, слизистую консистенцию, часто врастают
в агар.

на предметное стекло
наносят каплю физиологического раствора, в которой эмульгируют одну
каплю исследуемой культуры, закрывают покровным стеклом, края
заливают парафином и просматривают в световом микроскопе в фазовом
контрасте с иммерсией.

По морфологии L-формы
бруцелл представляют собой полиморфные клетки в виде шаров,
грушевидных и неправильной формы тел от 1 до 6 мкм с цитоплазмой
разной оптической плотности с вакуолями и зернистостью.

Зерна-гранулы могут располагаться как внутри крупных клеток, так и
лежать свободными зернистыми массами. В препарате могут находиться
клетки от 0,2 до 0,5 мкм гетероморфные или близкие по морфологии к
нормальным клеткам бруцелл.

Проба со специфической
сывороткой. L-культуры бруцелл сохраняют антигенное родство с
исходными штаммами бруцелл. Для предварительной быстрой
идентификации L-культур бруцелл ставят реакцию агглютинации на
стекле со специфической агглютинирующей поливалентной
антисывороткой в разведении 1:25.

Необходимо учитывать, что
L-культуры бруцелл очень плохо эмульгируются, что затрудняет учет
реакции. Поэтому рекомендуется сначала петлю культуры тщательно
растереть стеклянной палочкой в небольшом количестве
физиологического раствора и после этого каплю эмульсии перенести в
каплю специфической сыворотки на предметном стекле и параллельно в
каплю нормальной сыворотки или физиологического раствора в качестве
контроля.

5.1.5. Методы
дифференциации бруцеллПосле идентификации
культуры бруцелл проверяют на диссоциацию. С этой целью применяют
следующие тесты: проба с трипафлавином и реакция термоагглютинации
(проба с нагреванием).

Проба с раствором
трипафлавина (на стекле). На предметное стекло наносят каплю
солевого (0,85%) раствора трипафлавина 1:500, в котором
эмульгируется капля испытуемой культуры. У диссоциированных культур
быстро через 1-2 минуты наступает агглютинация с образованием
хорошо выраженных хлопьев.

Взвесь из S-форм культур остается
гомогенной.Реакция термоагглютинации. 2-3 мл 1х10 мкл/мл двухсуточной культуры бруцелл в
физиологическом растворе подогревают в пробирке на водяной бане при
90° в течение 30 минут.

Результаты учитывают через 30 минут, 1 час
и окончательно через 24 часа пребывания при комнатной температуре.
В эти сроки наступает, при наличии диссоциации, ясно выраженная
агглютинация клеток бруцелл, тогда как суспензия недиссоциированных
(S) штаммов остается гомогенной.

Дифференциации подлежат культуры
бруцелл, находящиеся только в S-форме.Тестами дифференциации
бруцелл являются: их отношение к росту в присутствии CO, образование HS, устойчивость к фуксину и тионину,
способность агглютинироваться монорецепторными сыворотками,
отношение к фагу “Тб”.

Дифференциация по
образованию сероводорода. В качестве реактива применяют водный
раствор уксусно-кислого свинца, в котором смачивают полоски
фильтровальной бумаги размером 1х8 см. Полоски затем просушивают.

Заготовленные впрок сухие полоски фильтровальной бумаги хранят в
банке из темного стекла с притертой пробкой не более 1-2
месяцев.Взвесь испытуемой
культуры в физиологическом растворе 9 (2х10 мкл в 1 мл) засевают
стандартной петлей (2 мм) на скошенную поверхность печеночного
агара (pH – 6,8-7,2).

Затем берут полоску фильтровальной бумаги и
зажимают между пробиркой и ватной пробкой так, чтобы нижний ее
конец свободно свисал над верхним краем посева и не касался
агаровой среды. Ватная пробка должна быть рыхлой, не задерживать
выхода из пробирки углекислоты.

Пробирки с посевами ставят в
термостат при 37 °С.Показателем интенсивности
образования сероводорода является почернение нижнего, свисающего
над посевом конца бумажки. Почернение бумажки измеряется в мм.

Результаты учитываются
через 2 дня в течение 6 дней. При каждом учете темневшую бумажку
заменяют новой. Для окончательной оценки способности культуры к
образованию сероводорода все три показателя складывают.Для B.

suis (биовар 1)
суммарный показатель образования сероводорода равен примерно 12-20
мм, для B.abortus (биовар 1) – около 5-7, B.melitensis (биовар 1),
как правило, совсем не образует сероводорода или вызывает только
легкое побурение свинцовой бумажки. У штаммов B.

Предлагаем ознакомиться:  Как мазать пимафуцином мужчинам - Все про молочницу

Лечение бруцеллеза

Принципы и методы терапии бруцеллёза зависят от его клинической формы. В соответствии с «Федеральными стандартами объема медицинской помощи, оказываемой больным бруцеллёзом» длительность госпитализации составляет 26 дней для больных острым бруцеллёзом и 30 дней — хроническим.

Комплекс лечения включает антибактериальную терапию, нестероидные противовоспалительные средства (НПВС), глюкокортикоиды, десенсибилизирующую, дезинтоксикационную, вакцино-, иммуно-, физиотерапию и санаторно-курортное лечение.

Антибактериальную терапию проводят при остросептической и других формах болезни при наличии лихорадочной реакции. Продолжительность лечения составляет 1,5 мес.

Доксициклин внутрь по 100 мг два раза в сутки стрептомицин в/м по 1 г/сут (первые 15 дней);

Доксициклин внутрь по 100 мг два раза в сутки рифампицин внутрь по 600– 900 мг/сут в 1–2 приёма;

Ко-тримоксазол внутрь по 960 мг два раза в сутки рифампицин внутрь по 600 мг 1–2 раза в сутки или стрептомицин в/м по 1 г один раз в сутки.

Эффективны также комбинации доксициклина с гентамицином и рифампицина с офлоксацином.

В связи с высокой эффективностью антибиотиков вакцинотерапию применяют редко. Используют лечебную бруцеллёзную вакцину.

Лечебная бруцеллёзная вакцина — взвесь бруцелл овечьего и бычьего вида, инактивированных (для внутрикожного введения) либо убитых нагреванием (для внутривенного введения), выпускается в ампулах с точным указанием количества микробных клеток в 1 мл.

Наибольшее распространение получило подкожное и внутрикожное введение вакцины. Подкожно вакцину назначают при декомпенсации процесса и при выраженной клинической симптоматике. Важный принцип вакцинотерапии — индивидуальный подбор дозы препарата.

О выраженности реакции судят по интенсивности пробы Бюрне. Подкожное введение чаще начинают с 10–50 млн микробных клеток. Если местная и общая реакция отсутствуют, то вакцину в увеличенной дозе вводят уже на следующий день.

Для лечения подбирают такую дозу, которая вызывает умеренную реакцию. Следующую инъекцию вакцины делают лишь после того, как исчезнет реакция на предыдущее введение вакцины. Разовую дозу в конце курса доводят до 1–5 млрд микробных клеток.

Внутрикожная вакцинотерапия более щадящая. Этот метод используют в стадии компенсации, а также при переходе заболевания в латентную форму. По выраженности кожной реакции подбирают рабочее разведение вакцины (оно должно вызвать местную реакцию в виде гиперемии кожи диаметром 5–10 мм).

Вакцину вводят внутрикожно в ладонную поверхность предплечья в первый день по 0,1 мл в три места, затем каждый день прибавляют по одной инъекции и доводят на 8-й день до 10 инъекций. Если реакция на вакцину уменьшается, используют меньшее разведение.

Следует учитывать, что даже при полном исчезновении всех клинических проявлений у 20–30% больных бруцеллёзом в дальнейшем может наступить обострение болезни.

диклофенак, ибупрофен, индометацин, мелоксикам, нимесулид и др. При неэффективности НПВС их сочетают с глюкокортикоидами (преднизолон, дексаметазон, триамцинолон) в средних терапевтических дозах (30–40 мг преднизолона перорально) со снижением дозы через 3–4 дня.

Хронические формы болезни, протекающие с обострением, при наличии изменений в иммунном статусе указывают на иммуносупрессию. Это показание к назначению иммуномодуляторов (имунофан, полиоксидоний и др.).

При поражениях опорно-двигательного аппарата и периферической нервной системы рекомендуют физиотерапию (индуктотерапия, электрофорез новокаина, лидазы, димексида; ультравысокочастотная терапия, ионогальванотерапия, применение озокерита, парафиновых аппликаций, массаж, лечебная гимнастика и др.).

После того как признаки активности процесса изчезают, назначают бальнеотерапию. Преимущество отдают местным курортам. При нейровегетативных нарушениях показаны гидрокарбонатные, гидросульфатно-сероводородные, радоновые воды.

Диспансеризация при бруцеллезе

Переболевшие острым и подострым бруцеллёзом находятся под наблюдением на протяжении 2 лет с момента заболевания, если отсутствуют клинико-иммунологические признаки хронизации процесса.

Переболевших обследует врач КИЗа в первый год через 1–3, 6, 9, 12 мес, а в течение второго года — ежеквартально. В это время они подлежат тщательному клиническому и серологическому обследованию (реакции Райта, РПГА, Хеддлсона).

В период диспансерного наблюдения проводят профилактическое противорецидивное лечение в первый год при каждом обследовании, в течение второго года — два раза (весной и осенью).

Переболевших острым и подострым бруцеллёзом с диспансерного учёта снимает комиссия в составе врача-инфекциониста, терапевта и эпидемиолога в том случае, если на протяжении последних 2 лет наблюдения не отмечали признаков хронизации процесса.

https://www.youtube.com/watch?v=ytdev

Больным хроническим бруцеллёзом ежеквартально проводят тщательное клиническое обследование с обязательной термометрией и серологическим исследованием (реакции Райта и РПГА). В периоды, наиболее неблагоприятные для течения заболевания (весной и осенью), необходимо противорецидивное лечение.

Переболевших хроническим бруцеллёзом снимают с диспансерного учёта так же, как и лиц с острым и подострым бруцеллёзом.

Пациентов с резидуальным бруцеллёзом направляют на лечение к соответствующим специалистам в зависимости от преимущественного поражения органов и систем.

Чабаны, доярки, ветеринарные работники, работники мясокомбинатов и другие профессиональные группы подлежат постоянному диспансерному наблюдению в течение всего периода работы.

Лица, взятые на учёт как подозрительные на заболевание бруцеллёзом (с положительными серологическими реакциями или аллергической пробой Бюрне) без явных клинических проявлений, должны обследоваться не реже одного раза в квартал.

Профилактика бруцеллеза

Профилактика бруцеллеза
включает комплекс ветеринарно-санитарных, хозяйственных и
медико-санитарных мероприятий, конечной целью которых является
ликвидация инфекции среди животных и прекращение заболеваний среди
населения.

Учитывая то, что бруцеллез – зоонозная инфекция, основой
эпидемического благополучия являются меры по профилактике инфекции
среди животных и ликвидации очагов эпизоотии в случае их
возникновения. Перечень общих профилактических мероприятий,
обязательных для учреждений, должностных лиц и граждан Российской
Федерации определен санитарными правилами СП 3.1.

085-96 и Ветеринарными правилами
ВП 13.3.1302-96 “Бруцеллез”.Медико-санитарные
мероприятия по профилактике бруцеллеза включают: 1) защиту людей от
инфицирования; 2) вакцинопрофилактику; 3) профилактические осмотры
профессиональных контингентов и 4) санитарно-просветительную
работу.4.1.

Мероприятия по защите людей от инфицированияМероприятия по
предупреждению заболеваний бруцеллезом людей следует проводить
согласно региональным и местным программам по борьбе и профилактике
бруцеллеза в республике, области (крае), районе и в каждом
отдельном хозяйстве, предприятии.


обеспечение должного санитарно-гигиенического состояния хозяйств и
предприятий, соблюдение дезинфекционного режима;-
соблюдение правил убоя животных из хозяйств, неблагополучных по
бруцеллезу, с последующей дезинфекцией оборудования, помещений и
обеззараживание отходов, дезинфекцией транспорта, которым
перевозились больные животные;

https://www.youtube.com/watch?v=ytadvertise


соблюдение установленных правил обработки и использования продуктов
убоя и молока от животных из хозяйств, неблагополучных по
бруцеллезу;-
соблюдение правил работы с животными в хозяйствах: обеспечение
персонала, в т.ч.

лиц, временно привлекаемых к работам, связанным с
риском заражения бруцеллезом, средствами личной гигиены и
индивидуальной защиты (халаты, резиновые перчатки, нарукавники,
клеенчатые фартуки, специальная обувь и др.

), своевременная их
замена и стирка;-
наличие и правильная эксплуатация бытовых помещений, комнат для
отдыха, мест приема пищи, душевых и др.;-
обеспечение горячей водой, моющими средствами, дезинфицирующими
средствами;


организация в хозяйствах и на предприятиях централизованной
дезинфекции, стирки и чистки спецодежды;-
обязательный инструктаж работников по правилам гигиены,
использованию средств индивидуальной защиты, соблюдению
противобруцеллезного режима;

аналогичный инструктаж должны
проходить индивидуальные владельцы сельскохозяйственных
животных;-
допуск к работам, связанным с риском заражения бруцеллезом, только
после прохождения инструктажа и проведения в установленном порядке
профилактических противобруцеллезных прививок.

Контроль в порядке
государственного санитарно-эпидемиологического надзора за
организацией и проведением противобруцеллезных мероприятий и
соблюдением противобруцеллезного режима в животноводческих и
индивидуальных хозяйствах, на предприятиях, перерабатывающих
продукты и сырье животного происхождения, в лабораториях,
работающих с вирулентными культурами, в части предупреждения
заболеваний людей осуществляется центрами госсанэпиднадзора.

Плановые обследования по
соблюдению противобруцеллезного режима в животноводческих
хозяйствах, на отгонных пастбищах, убойных пунктах, пунктах стрижки
овец, мясо- и молококомбинатах и других предприятиях, где имеется
риск заражения бруцеллезом, следует проводить эпидемиологам
совместно с санитарными врачами, курирующими данные объекты, а
также с ветеринарными специалистами.

Частота плановых обследований
зависит от эпизоотической ситуации. Результаты обследования объекта
следует доводить до администрации для принятия соответствующих
мер.4.2.
Профилактическая вакцинация людей против бруцеллезаПоказанием к вакцинации
людей является угроза заражения B.

melitensis в связи с
распространением бруцеллеза среди овец и коз, а также при
установленной миграции бруцелл этого вида на крупный рогатый скот
или другой вид животных.В
районах, свободных от бруцеллеза козье-овечьего вида, иммунизация
персонала хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу, вызванному
B.

abortus, suis, ovis, canis, не проводится.Прививки постоянным и
временным работникам животноводства проводятся до полной ликвидации
в хозяйствах бруцеллеза козье-овечьего вида, а персоналу
предприятий по переработке сырья и продуктов животноводства – до
полной ликвидации бруцеллеза в хозяйствах, откуда поступает скот,
сырье и продукты животноводства.

Прививкам подвергаются также
работники бактериологических лабораторий, работающие с живыми
культурами бруцелл и с зараженными животными.Для иммунизации людей
против бруцеллеза используется сухая живая вакцина, приготовленная
из вакцинного штамма коровьего вида (B.

abortus 19-ВА).Эпидемиологическая
эффективность прививок зависит от правильного определения показаний
к их проведению, полноты отбора подлежащих иммунизации
профессиональных групп, в т.ч. временного персонала, соблюдения
сроков вакцинации, методики проведения прививок, иммунологических
свойств вакцины и соблюдения необходимых условий ее хранения.

Контроль за планированием
и проведением прививок возлагается на центры госсанэпиднадзора.Перед прививками
проводится медицинский осмотр всех лиц, подлежащих вакцинации с
обязательным серологическим (р.

Хеддлсона или ИФА) и аллергическим
(проба Бюрне с бруцеллезным аллергеном или реакция лизиса
лейкоцитов) обследованием. Вакцинации подлежат лица с четкими
отрицательными серологическими и аллергическими реакциями на
бруцеллез.

Прививки не проводятся
лицам моложе 18 лет, женщинам в период беременности и грудного
вскармливания, т.к. эти контингенты не должны привлекаться к
работам, связанным с риском заражения бруцеллезом, а также лицам,
имевшим положительные серологические или аллергические реакции на
бруцеллез на протяжении последних 2 лет.

К
работе с инфицированными животными или сырьем от них люди могут
допускаться не ранее чем через 1 месяц после прививок. Иммунитет
сохраняет наивысшую напряженность в течение 5-6 месяцев. В связи с
этим при определении сроков прививок в животноводческих хозяйствах
необходимо строго руководствоваться данными о времени окота (ранний
окот, плановый, внеплановый).

Ревакцинация проводится
через 10-12 месяцев после вакцинации лицам с отрицательными
серологическими и аллергическими реакциями на бруцеллез.Прививки против
бруцеллеза могут быть достаточно эффективными лишь при
одновременном проведении всего комплекса санитарных и ветеринарных
мероприятий.4.3.


постоянные и временные работники животноводческих, звероводческих
хозяйств (ферм), как благополучных, так и неблагополучных по
бруцеллезу любого вида скота, лица, занятые обслуживанием,
стрижкой, убоем животных, первичной обработкой и транспортированием
сырья и продуктов животноводства из этих хозяйств;


постоянные и временные работники предприятий по переработке сырья и
продуктов животноводства, поступающих из районов и хозяйств,
неблагополучных по бруцеллезу любого вида;-
медицинский, ветеринарный, зоотехнический и другой персонал,
работающий с живыми культурами бруцелл или зараженным материалом, с
больными и подозрительными в заражении бруцеллезом животными.

Диспансерным
профилактическим осмотрам подлежат работники всех хозяйств и
предприятий независимо от форм их собственности.Руководство и организация
диспансеризации осуществляется органами управления
здравоохранением.

Центры госсанэпиднадзора контролируют охват
контингентов, подлежащих периодическим медицинским осмотрам на
бруцеллез, составляют перечень объектов с числом работающих в них,
оценивают значение неблагоприятных производственных факторов.

Перечень объектов корректируется не реже одного раза в 2 года.Администрация отобранных
объектов представляет поименные утвержденные списки работающих,
подлежащих периодическим медицинским осмотрам на бруцеллез.

Основным специалистом,
проводящим периодические медицинские осмотры, является терапевт
(территориальный или цеховой). При этом проводится серологическое
обследование на бруцеллез в реакции Хеддлсона или ИФА.

На
территориях с длительным благополучием по бруцеллезу
сельскохозяйственных животных (не менее 5 лет) серологическое
обследование проводят один раз в два года.Лица, положительно
реагирующие на бруцеллез, больные с клиническими проявлениями,
характерными для бруцеллезной инфекции (поражение
опорно-двигательного аппарата, нервной системы, нарушение слуха,
зрения, воспалительные заболевания мочеполовой системы и др.

),
подлежат углубленному медицинскому осмотру с привлечением
специалистов по профилю клинических проявлений (инфекционист,
невропатолог, гинеколог, уролог, хирург и др.).Лица с положительными и
сомнительными серологическими реакциями без клинических проявлений
(группа положительно реагирующих на бруцеллез) подлежат тщательному
обследованию в динамике врачом-инфекционистом два раза в год с
обязательным лабораторным исследованием сыворотки крови на
бруцеллез и при необходимости специалистами по профилю выявленной
патологии.

Уточнение или
подтверждение диагноза проводится в инфекционных стационарах
(отделении, больнице) врачом-инфекционистом.Профилактические
медицинские осмотры животноводов следует проводить через 1-2 месяца
после окончания массового окота и отела животных (обычно II
квартал), работников предприятий по переработке сырья и продуктов
животноводства – через 1-2 месяца после массового убоя скота (не
позднее III квартала).

Лица, временно
привлекаемые к уходу за животными и к переработке сырья и продуктов
животноводства, обследуются через 1-2 месяца после сезонных работ.
Контроль за полнотой охвата этих контингентов осуществляет
санитарно-эпидемиологическая служба.

Во время проведения
периодических медицинских осмотров и лабораторного обследования
широко проводится санитарно-просветительная работа среди
обследуемых контингентов.4.4.
Гигиеническое воспитание населенияЦелью гигиенического
воспитания является доведение до широких слоев населения
необходимых санитарно-гигиенических знаний.

Основными задачами
гигиенического воспитания по вопросам профилактики бруцеллеза
являются:Формирование у населения
четкого представления о том, что бруцеллез – зоонозная инфекция,
при которой источником заболевания являются больные
сельскохозяйственные животные.

Доведение информации о
распространении болезни среди животных, путях заражения бруцеллезом
и степени опасности для человека, обратив внимание на
профессиональный характер заболевания.Ознакомление населения с
основными мерами профилактики бруцеллеза, особо подчеркнув важность
своевременного выявления заболевших животных, необходимость их
изоляции и проведения санитарных, специальных ветеринарных,
дезинфекционных и других мероприятий;

значение мероприятий по
охране благополучных хозяйств от заноса инфекции; необходимость
соблюдения мер личной гигиены; недопущение детей и подростков к
уходу за больными животными как в общественных, так и личных
хозяйствах;

необходимость термической обработки пищевых продуктов
животного происхождения; значение прививок против бруцеллеза.Населению необходимо
постоянно объяснять, что профилактика бруцеллеза включает комплекс
хозяйственных, санитарных, ветеринарных и медицинских
мероприятий.

В
зависимости от особенностей групп населения, среди которых
проводится эта работа, следует акцентировать внимание на вопросах
предупреждения заражения среди профессиональных групп. Для
работников животноводства следует показать наносимый бруцеллезом
экономический ущерб, подчеркнуть, что от них зависит выявление
первых случаев абортов у животных, проведение срочных
дезинфекционных мер, что способствует оздоровлению стада и всего
хозяйства.

Работников
животноводческих (звероводческих) хозяйств (ферм), предприятий,
перерабатывающих сырье и продукты животного происхождения, наиболее
подробно следует ознакомить с мерами личной профилактики, их
правами и правилами по обеспечению их спецодеждой, а также всем
необходимым для выполнения мер личной профилактики.

Для лиц, имеющих в личных
хозяйствах коз, овец и других сельскохозяйственных животных, важно
подчеркнуть значение своевременности проведения санитарных и
ветеринарных мер при первых признаках заболевания животных
бруцеллезом, отметить, что нарушение и несоблюдение их приводит к
дальнейшему распространению инфекции и заражению людей, к большим
экономическим убыткам.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcopyright

Необходимо подчеркнуть
опасность заражения бруцеллезом детей и подростков, если они
принимают участие в уходе за больными животными.Не следует детально
останавливаться на клинике бруцеллеза у людей, достаточно отметить
лишь основные симптомы, подчеркнуть, что диагностировать это
заболевание может только врач.

Ссылка на основную публикацию

Adblock detector